免费在线国产不卡视频-国产一卡二区三区四区-九九热久久国产思思久久-日本一区二区三区高清

歡迎訪問上海研生實業(yè)有限公司網(wǎng)站

返回首頁|聯(lián)系我們

全國統(tǒng)一服務(wù)熱線:

15201736385
資料下載您當(dāng)前的位置:首頁 > 資料下載 > 煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

日期:2024/4/29瀏覽:399次

煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

產(chǎn)品特點

1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴增;

2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個循環(huán)只需20多分鐘;

3. 抗干擾能力強,反應(yīng)重復(fù)性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進行檢測分析。

在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。

 特異性熒光標(biāo)記:

 TaqMan法

煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒 TaqMan探針的特性:

(1)5′端標(biāo)記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等

(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)

(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光

(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針

相對定量通過內(nèi)標(biāo)定量:

內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。

相對定量分析方法  :

 2-ΔΔCt

前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)

  1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:

    ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test) 

    ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator) 

  2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:

         ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)

  3、計算表達水平比率:

                    2 –ΔΔCT=表達量的比值

煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:

(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;

(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴增檢測的可靠性。

步驟(2)為:待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。

其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法,所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。 正辛酸乙酯shēng huà shì jì容量:100毫克  大鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)免疫試劑盒 Rat cyclooxygenase-2,COX-2 ELISA Kit

實驗注意事項:


1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;


2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;


3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。


4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。


實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。


煙曲霉探針法熒光定量PCR試劑盒主要服務(wù):DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。


主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。


文件下載    

上一篇:猴免疫缺陷病毒PCR檢測試劑盒說明書

下一篇:?熒光假單胞菌探針發(fā)熒光定量PCR試劑盒說明書

在線客服 聯(lián)系方式 二維碼

服務(wù)熱線

021-59989018

掃一掃,關(guān)注我們

精品少妇一区二区三区四区| 伊人天堂午夜精品草草网| 国产超碰在线观看免费| 日韩午夜福利高清在线观看| 日韩欧美国产三级在线观看| 国产一级一片内射视频在线| 免费在线成人午夜视频| 高潮少妇高潮久久精品99| 精品推荐国产麻豆剧传媒| 亚洲成人免费天堂诱惑| 色一情一伦一区二区三| 久久精品久久精品中文字幕| 日韩精品一级片免费看| 国产成人精品一区二区在线看| 欧美成人国产精品高清| 中文字幕一区二区熟女| 欧美特色特黄一级大黄片| 国产精品尹人香蕉综合网| 大香蕉网国产在线观看av| 国产成人午夜av一区二区 | 久久精品国产99精品亚洲| 97人妻精品免费一区二区| 久久99青青精品免费| 麻豆剧果冻传媒一二三区| 亚洲免费视频中文字幕在线观看| 精品人妻一区二区三区四区久久| 视频在线免费观看你懂的| 国产免费成人激情视频| 日本少妇aa特黄大片| 午夜视频成人在线免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 热久久这里只有精品视频| 欧美一区二区口爆吞精| 久久国产精品热爱视频| 综合久综合久综合久久| 欧美日韩国产自拍亚洲| 天堂av一区一区一区| 亚洲视频一级二级三级| 欧美一级不卡视频在线观看| 亚洲成人精品免费在线观看 | 日本熟妇五十一区二区三区|