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人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒說明書

日期:2024/6/4瀏覽:421次

人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱:人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒

Name :Human Herpesvirus-8 (HHV-8) PCR Kit

【包裝規(guī)格】50 次/盒

【產(chǎn)品及特點(diǎn)】

人皰疹病毒 8 型(Human Herpesvirus-8,HHV-8)是從淋巴增生性疾

病和艾滋病患者淋巴細(xì)胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒,可通過唾液飛沫及密

切接觸(如接吻,共用餐、飲器具等)、輸血傳播。除免疫低

下(如先天性免疫缺陷、艾滋病、長期服用免疫抑制劑等)外,絕大多數(shù)

人感染后終身都不會(huì)產(chǎn)生明顯癥狀;免疫低下者,如 HIV 感染者,當(dāng)人

體特異性免疫被削弱至一定程度時(shí), 潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感

染癥狀,此時(shí)會(huì)出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥

狀,活化的病毒可大規(guī)模感染 T 淋巴細(xì)胞,使免疫功能進(jìn)一步削弱,該

病毒對(duì)人體健康有較大影響,因此檢測(cè)人皰疹病毒 8型 DNA 具有重要意

義。本產(chǎn)品就是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的、檢測(cè)此病毒的試劑盒。本產(chǎn)品具

有下列特點(diǎn):

1.即開即用,用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增人皰疹病毒8 型病毒 DNA,與

其他病毒沒有交叉反應(yīng)。

3.提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。

5.本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。

【規(guī)格及成分】

成 份 編號(hào) 十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0 63981 1 mL(紅蓋)

超純水 109350 1 mL(亮黃色)

人皰疹病毒 8型 PCR 引物混合液 3026yw 100 μL(白蓋)

人皰疹病毒 8 型 PCR 陽性對(duì)照

(1×10E8 拷貝/μL)

93981-3026pc 50 μL(黃蓋)

【運(yùn)輸及保存】

低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為一年。人皰疹病毒 8 型 PCR 陽性對(duì)

照需要單獨(dú)放置,不要污染其他試劑。

【自備試劑】

樣品 DNA。

【使用方法】

一、樣品 DNA 的制備

用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA

提取試劑盒兼容。

2.如果有 N 個(gè)樣品,則需做 N+2 個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和

一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是人皰疹病毒8 型 PCR 陽性

對(duì)照的 1000 倍稀釋液,其總體積等于試劑盒所需的樣品量,樣品制備陰

性對(duì)照是直接用水。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)

3.對(duì) N+2 個(gè)樣品,在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰

性對(duì)照,故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成

分:

成分

N+2 個(gè)

樣品管

PCR 陰性

對(duì)照

PCR 陽性

對(duì)照

PCR Magic Mix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

人皰疹病毒 8 型通用 PCR 引物混

合液

各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 個(gè)樣品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 陰性對(duì)照(水) - 18 μL -

PCR 陽性對(duì)照(人皰疹病毒 6 型通

用 PCR 陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋

液)

- - 18 μL

4.按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng): 過程 溫度 時(shí)間

預(yù)變性 95℃ 5 min

PCR 反應(yīng)

(35 個(gè)循環(huán))

95℃ 15 sec

55℃ 15 sec

82℃ 30 sec 最后延伸 82℃ 10 min 三、電泳檢測(cè)

5.取 5μL PCR 產(chǎn)物電泳進(jìn)行檢測(cè)。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束

后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長

度為 481bp。陽性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn),陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增,否

則實(shí)驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增

以排除 PCR 抑制劑的感染。


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