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更新時(shí)間:2024-11-04
小鼠心臟干細(xì)胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
心臟組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 長梭形 | YS-01X7427 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠心臟干分離自心臟組織;心臟是脊椎動(dòng)物身體中最重要的一個(gè)器官,主要功能是為血液流動(dòng)提供壓力,把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟由心肌構(gòu)成,左心房、左心室、右心房、右心室四個(gè)腔組成。左右心房之間和左右心室之間均由間隔隔開,故互不相通,心房與心室之間有瓣膜(房室瓣),這些瓣膜使血液只能由心房流入心室,而不能倒流。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng),向器官、組織提供充足的血流量,以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì),并帶走代謝的終產(chǎn)物(如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等),使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。研究發(fā)現(xiàn),心臟干細(xì)胞是一種多潛能細(xì)胞,具有再生和克隆能力,并可分化為心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。體內(nèi)研究顯示,從心臟中分離出的心臟干細(xì)胞,經(jīng)體外簡(jiǎn)單培養(yǎng)、增殖和標(biāo)記后,移植到心肌梗死邊緣區(qū)域,心梗血流動(dòng)力學(xué)和心室壁厚度較對(duì)照組明顯改善,心肌梗死邊緣區(qū)域發(fā)現(xiàn)有標(biāo)記的心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。盡管其新生心肌細(xì)胞較小,但表達(dá)一些特殊肌蛋白如心臟肌球蛋白重鏈、α-肌動(dòng)蛋白、α-輔肌動(dòng)蛋白、連接蛋白等,證實(shí)了心臟干細(xì)胞對(duì)心肌梗死的修復(fù)作用。干細(xì)胞移植治療是目前心肌梗死和缺血性心臟病細(xì)胞重建的主要方法,成體干細(xì)胞中的c-kit陽性心臟干細(xì)胞因其來源于心臟,有定向心臟細(xì)胞系分化的趨勢(shì),體內(nèi)外可以分化成心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞,同時(shí)自體移植不存在免疫排斥反應(yīng)及倫理問題已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)。短期內(nèi)獲得治療量的自體心臟干細(xì)胞是這一治療應(yīng)用于臨床的關(guān)鍵所在。因此,研究一種新的分離培養(yǎng)方法可在短時(shí)期內(nèi)獲得大量純度較高的自體c-kit陽性心臟干細(xì)胞成為目前干細(xì)胞領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問題之一。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟干采用機(jī)械剪碎組織、膠原酶分次消化法結(jié)合差速貼壁、心臟干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠心臟干經(jīng)c-kit免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 長梭形
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠髓過氧化物酶(MPO)試劑盒 96T/48T
小鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子1(aFGF-1)試劑盒 96T/48T
小鼠絲酸/蘇酸蛋酸酶(STK)試劑盒 96T/48T
小鼠水通道蛋白5(AQP-5)試劑盒 96T/48T
小鼠糖化白蛋白(GA)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ELISA Kit 大鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)試劑盒
Humahymus-leukemiaaigen,TLaELISAKit 人白血病抗原(TLa)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
ChikenPullorumDiseaes,PD試劑盒雞白痢抗體檢測(cè)(PD)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒-LEPTIN10/20次
Mouseeosinophilchemotacticfactor,ECFELISAKit小鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)試劑盒規(guī)格:96T/48T
alpha 1腎上腺素能受體A抗體
胞吞再循環(huán)相關(guān)銜接蛋白CENTB1抗體
BACE1重組人 BACE1 / ASP2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
角蛋白2(KRT2)重組蛋白 Recombinant Keratin 2 (KRT2)
GAL重組人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
CHL1 Protein Human 重組人 CHL-1 蛋白
HA Protein H5N8 重組甲型流感 H5N8 (A/turkey/Ireland/1378/1983) 血凝素 (Hemagglutinin) 蛋白 His 標(biāo)簽)
角蛋白2(KRT2)重組蛋白 Recombinant Keratin 2 (KRT2)
CHL1 Protein Human 重組人 CHL-1 蛋白
BACE1重組人 BACE1 / ASP2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
HA Protein H5N8 重組甲型流感 H5N8 (A/turkey/Ireland/1378/1983) 血凝素 (Hemagglutinin) 蛋白 His 標(biāo)簽)
GAL重組人 Galanin / GAL 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
小鼠心臟干細(xì)胞大鼠蛋白激酶Cγ(PKCγ)試劑盒 ,英文名: PKCγ ELISA Kit
N- acetyl - seryl - aspayl -- lysyl - proline (AcSDKP 人N-乙?;?span>-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯(AcSDKP
RatIerleukin15,IL-15ELISAKIT 大鼠白介素15(IL-15)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforCXCR1(HumanCXC-chemokinereceptor1)ELISAKit人CXC趨化因子受體1
細(xì)胞色素P450亞酶CYP3A1(BROD)活性熒光定量試劑盒20次
RatFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit大鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)試劑盒規(guī)格:96T/48T