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產(chǎn)品型號:
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:761
更新時間:2024-11-05
兔腸平滑肌細胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
腸 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X8330 |
細胞簡介:
兔腸平滑肌分離自腸組織;不區(qū)分大腸、小腸等;小腸位于腹中,上端接幽門與胃相通,下端通過闌門與大腸相連,是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內(nèi),上連胃幽門,下接盲腸,分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的,因為食物經(jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學性消化及小腸運動的機械性消化后,基本上完成了消化過程,同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點是管壁有環(huán)形皺襞,粘膜有許多絨毛,絨毛根部的上皮下陷至固有層,形成管狀的腸腺,其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切;構(gòu)成腸腺的細胞有柱狀細胞、杯狀細胞、潘氏細胞和未分化細胞。柱狀細胞和內(nèi)分泌細胞與絨毛上皮相似,接近絨毛的柱狀細胞與吸收細胞相似,絨毛深部的柱狀細胞微絨毛少而短,不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運動功能,其中以吸收和分泌功能為主。平滑肌細胞的收縮是負責腸蠕動的動力,促使食物向下運動。小腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數(shù)細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網(wǎng)狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。小腸平滑肌肉瘤是起源于小腸壁肌層、黏膜下肌層和腸壁血管平滑肌的惡性腫瘤,是小腸結(jié)締組織惡性腫瘤中常見的一種。因此,體外小腸平滑肌細胞的培養(yǎng)對研究小腸平滑肌肉瘤提供了基礎(chǔ)和前提。此外,體外培養(yǎng)細胞,由于影響因素較為單一,是研究細胞功能以及相應(yīng)的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制的基礎(chǔ)。
方法簡介:
實驗室分離的兔腸平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔腸平滑肌體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
異基-β-D-硫代半乳糖苷 10g
IPTG,DioxaneFree 100g
磺酸 SHES 25g
Isicacidsodiumsalt 100g
羊孕激素/孕酮(PROG)ELISA 試劑盒
Human ai lymphocyte aibody (ALA/LCA) ELISA Kit 人抗淋巴細胞毒抗體(ALA/LCA)試劑盒
HumanVitaminD2,VD2ELISAKit 人D2(VD2)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforADH(Humanalcoholdehydrogenase)ELISAKit人乙醇脫氫酶
血液游離氨基酸含量比色法定量試劑盒20次
MouseQalymphocyteaigen2region,Qa-2ELISAKit小鼠Qa淋巴細胞抗原2(Qa-2)試劑盒
SLFNL1抗體
細胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白1抗體
CSNK2A1重組小鼠 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 Protein
S轉(zhuǎn)移酶κ1(GSTκ1)重組蛋白 Recombinant Glutathione S Transferase Kappa 1 (GSTk1)
PLBD2重組人 PLBD2 蛋白 (His 標簽) Protein
CA4 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 標簽)
ERBB3 Protein Rhesus 重組恒河猴 HER3 / ErbB3 蛋白
白介素12B(IL12B)重組蛋白 Recombinant Interleukin 12B (IL12B)
CA4 Protein Human 重組人 Carbonic Anhydrase IV / CA4 蛋白 (His 標簽)
NGFR重組小鼠 NGFR / P75 蛋白 (His 標簽) Protein
PTGFRN Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EWI-F / PTGFRN 蛋白 (His 標簽)
UBASH3B重組人 UBASH3B / Sts1 / TULA-2 蛋白 (His 標簽) Protein
兔腸平滑肌細胞大鼠β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)試劑盒 ,英文名: Aβ1-42 ELISA Kit
Rabbit Endothelin 1 (ET-1) ELISA Kit 兔子內(nèi)皮素1(ET-1)試劑盒
ELISA 小鼠食欲素A(mouse Orexin A) 進口分裝
CLIAKitforIL-1(MouseIerleukin1)ELISAKit小鼠白介素1
通用型內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)染色試劑盒100次
ELISAKitVEGF大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行
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