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更新時(shí)間:2024-10-29
大鼠胚胎干細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
囊胚 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 短梭形、多角形 | YS-01X7741 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠胚胎干分離自囊胚胚胎組織;胚胎干細(xì)胞(Embryonic stem cell,ESCs,簡(jiǎn)稱(chēng)ES、EK或ESC細(xì)胞)是早期胚胎(原腸胚期之前)或原始性腺中分離出來(lái)的一類(lèi)細(xì)胞,它具有體外培養(yǎng)無(wú)限增殖、自我更新和多向分化的特性。無(wú)論在體外還是體內(nèi)環(huán)境,ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類(lèi)型。進(jìn)一步說(shuō),胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性,能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官,包括生殖細(xì)胞。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu),細(xì)胞核大,有一個(gè)或幾個(gè)核仁,胞核中多為常染色質(zhì),胞質(zhì)胞漿少,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。體外培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞排列緊密,呈集落狀生長(zhǎng)。用堿性磷酸酶染色,ES細(xì)胞呈棕紅色,而周?chē)某衫w維細(xì)胞呈淡黃色。細(xì)胞克隆和周?chē)嬖诿黠@界限,形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清,細(xì)胞表面有折光較強(qiáng)的脂狀小滴。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣,多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米~18 微米,豬、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深,直徑12 微米~18 微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別,有其特定的生長(zhǎng)特性和特定的標(biāo)志,例如堿性磷酸酶活性非常高,帶有胚胎階段特異性表面抗原( Stage- specific embryonic antigens,SSEA),人類(lèi)胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標(biāo)志,這些特性和標(biāo)志均可以用于對(duì)胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定,除此之外,胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代,并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子( Leukaemia inhibitory factor,LF)或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層(MEF)上培養(yǎng)時(shí),胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖,長(zhǎng)期保持核型正常和穩(wěn)定,凍存解凍也不影響不分化的特性。另外,胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性,目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān),多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn),也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長(zhǎng)的原因。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎干采用分離囊胚組織,去除胚胎透明帶、使用特制專(zhuān)用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng),消化傳代純化制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠胚胎干經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次;
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 短梭形、多角形
傳代特性 可傳5-8代左右
消化液 0.025%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠纖維連接蛋白 英文名稱(chēng): Fibronectin 規(guī)格: 英文縮寫(xiě): FN
FMS樣酪酸激酶 英文名稱(chēng): Fms-related tyrosine kinase-3 規(guī)格: 英文縮寫(xiě): Flt3
小鼠Flt3配體 英文名稱(chēng): Fms-related tyrosine kinase-3 Ligand 規(guī)格: 英文縮寫(xiě): Flt3 Ligand
小鼠纖維連接蛋白 英文名稱(chēng): fibronecti 規(guī)格: 英文縮寫(xiě): FN
小鼠胃泌酸調(diào)節(jié)素(OXM)試劑盒 96T/48T
Human phosphoenolpyruvate carboxykinase (PCK) ELISA Kit 人0酸烯醇式酸羧激酶(PCK)試劑盒
Humanalkalinephosphatase,ALPELISAKit 人堿性0酸酶(ALP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
ChickenIerleukin1,IL-1試劑盒雞白介素1(IL-1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞ERK蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶MM(GP-MM)試劑盒規(guī)格:96T/48T
PE標(biāo)記人CD18單克隆抗體
酪激酶A/B/C重組兔單克隆抗體
PTPN11重組小鼠 SHP2 / PTPN11 蛋白 Protein
泛素(Ub)重組蛋白 Recombinant Ubiquitin (Ub)
PRKAR1A重組人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 蛋白 Protein
CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
EFNA5 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白
轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)天然蛋白 Native Transferrin Receptor (TFR)
CDK16 Protein Human 重組人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CD6重組小鼠 CD6 / TP120 蛋白 Protein
PRLR Protein Rat 重組大鼠 PRLR / Prolactin receptor 蛋白
CCL1重組人 I-309 / CCL1 / TCA-3 蛋白 Protein
大鼠胚胎干細(xì)胞兔子內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA 試劑盒
People leils binding type AFP / AFP varia 2 (AFP-L2) ELISA kit E 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)試劑盒E
Humanpolyimmunoglobulieceptor,poly-IgRELISAKit 人多免疫球蛋白受體(poly-IgR)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humandynorphin,Dyn試劑盒人強(qiáng)啡肽(Dyn)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織P38a激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
Humanperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit人過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
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