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更新時間:2024-10-29
大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
視網(wǎng)膜組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細胞樣 | YS-01X7369 |
細胞簡介:
大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮分離自視網(wǎng)膜組織;視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,由色素上皮細胞組成,它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網(wǎng)膜分為10層,由外向內(nèi)分別為:色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,有感光作用;后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成。神經(jīng)元是視細胞層,專司感光,它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上,而視錐細胞則在中心凹處多。層叫雙節(jié)細胞,約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系,負責聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細胞層,專管傳導。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復雜的結(jié)構(gòu),它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,經(jīng)由視神經(jīng)到達出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區(qū),其分辨能力強。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細胞,它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用,在視網(wǎng)膜血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義。由于從不同的組織和器官獲得的內(nèi)皮細胞具有不同的特性,在腦和視網(wǎng)膜中,這些內(nèi)皮細胞具有內(nèi)屏障的功能,在調(diào)節(jié)血管生理狀態(tài),釋放血管活性物質(zhì)以及新生血管的形成中發(fā)揮著重要作用,體外分離培養(yǎng)RCEC對研究視網(wǎng)膜血管性疾病發(fā)生發(fā)展的病理生理機制以及疾病的早期防治具有重要臨床意義。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISAKit ELISA. 96T/48T
人過氧化酶(GSH-Px)ELISAKit ELISA. 96T/48T
人(GSH)ELISAKit ELISA. 96T/48T
人17-類固醇(17-KS)ELISAKit ELISA. 96T/48T
豚鼠表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human cytovillin / Ezrin protein (cytovillin/ezrin) ELISA Kit 人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)試劑盒
HumanSS-A/RoaibodyELISAKit 人抗SS-A/Ro抗體試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4試劑盒人周期素依賴性激酶4(CDK-4)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織GRK5激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit人抗多發(fā)性肌硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
蛋白酶體抑制劑亞基PI31抗體
鞘脂激活蛋白原抗體
ICOS重組小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標簽) Protein
α2-巨球蛋白(α2M)重組蛋白 Recombinant Alpha-2-Macroglobulin (a2M)
HNRNPR重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白
CDH18 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白
甘露糖受體C1樣蛋白1(MRC1)重組蛋白 Recombinant Mannose Receptor C Type 1 Like Protein 1(MRC1)
IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白
AKT3重組小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 標簽) Protein
FCGR2B Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白
CDH1重組人 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 (Fc 標簽) Protein
大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞人孕酮受體(PGR)ELISA 試劑盒
Human tumor vascular endothelial growth factor (TAF) ELISA Kit 人腫瘤血管生長因子(TAF)試劑盒
HumanBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit 人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導蛋白(Bid)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humaninsulin-likegrowthfactors2,IGF-2試劑盒人胰島素樣生長因子2(IGF-2)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織己糖激酶(HEXOKINASE)酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量試劑盒20次
HumanLDL-ICELISAKit人低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
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