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廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
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更新時(shí)間:2024-10-30
人宮頸癌成纖維細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
宮頸癌組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7616 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
人宮頸癌組織源成纖維分離自患有宮頸癌病人的宮頸癌組織;宮頸癌也稱子宮頸癌,指發(fā)生在子宮陰道部及宮頸管的惡性腫瘤,是女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一,發(fā)病率位于女性腫瘤的位。宮頸癌可向鄰近組織和器官直接蔓延,向下至陰道穹窿及陰道壁,向上可侵犯子宮體,向兩側(cè)可侵犯盆腔組織,向前可侵犯膀胱,向后可侵犯直腸。也可通過(guò)淋巴管轉(zhuǎn)移至宮頸旁、髂內(nèi)、髂外、腹股溝淋巴結(jié),晚期甚至可轉(zhuǎn)移到鎖骨上及全身其他淋巴結(jié)。血行轉(zhuǎn)移比較少見(jiàn),常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移部位是肺、肝及骨。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細(xì)胞生存的外部環(huán)境,由不同種類的非腫瘤性的細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)構(gòu)成,包括纖維細(xì)胞,免疫細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,間充質(zhì)干細(xì)胞等,腫瘤細(xì)胞通過(guò)調(diào)控這些間質(zhì)細(xì)胞,創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉(zhuǎn)移的條件,從而使得腫瘤得到進(jìn)展。越來(lái)越多的證據(jù)表明,腫瘤微環(huán)境的改變?cè)谀[瘤進(jìn)展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中,研究最多也是最主要的間質(zhì)細(xì)胞是腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞演化而來(lái)。宮頸癌組織源成纖維細(xì)胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。剛分離的宮頸癌組織源成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開(kāi)始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人宮頸癌成纖維采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人宮頸癌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豚鼠P物質(zhì) 英文名稱: Guinea pig Substance P 規(guī)格: 英文縮寫: SP
豚鼠睪激素 英文名稱: Guinea pig Testosterone 規(guī)格: 英文縮寫: TESTO
豚鼠免疫球蛋白E 英文名稱: Immunoglobulin E 規(guī)格: 英文縮寫: IgE
豚鼠粘多糖 英文名稱: Mucopolysaccharide 規(guī)格: 英文縮寫: MLC
小鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat prostaglandin E2 (PGE2) ELISA Kit 大鼠前列腺素E2(PGE2)試劑盒
Human8-epi-prostaglandinF2alpha,8-epi-PGF2αELISAKit 人8-異構(gòu)前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanBigEndothelin,BigET試劑盒人大內(nèi)皮素(BigET)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物總氨基酸含量比色法定量試劑盒20次
HumanSuperOxidaseDimase,SODELISAKit人超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒規(guī)格:96T/48T
橋粒斑菲素蛋白3抗體
轉(zhuǎn)錄因子ELYS蛋白抗體
M1重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Matrix protein 1 / M1 蛋白 Protein
PT141(Bremelanotide PT-141 1gPT141(Bremelanotide PT-141) 雌性激素肽
RELT重組人 RELT / TNFRSF19L 蛋白 Protein
FSTL5 Protein Human 重組人 FSTL5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
PT141(Bremelanotide PT-141 1gPT141(Bremelanotide PT-141) 雌性激素肽
FSTL5 Protein Human 重組人 FSTL5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
M1重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Matrix protein 1 / M1 蛋白 Protein
EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
RELT重組人 RELT / TNFRSF19L 蛋白 Protein
人宮頸癌成纖維細(xì)胞大鼠血紅素氧合酶1(HO1)試劑盒 ,英文名: HO1 ELISA Kit
Mouse coicosterone / coicosterone (CO) ELISA Kit 小鼠皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CO)試劑盒
Mousetumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AILR3ELISAKit 小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(AIL-R3)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumancecropinB,CecBELISAKit人殺菌肽B
細(xì)胞C-MET激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitDAT大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
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